在 实时荧光定量PCR ( qPCR )实验中，每一个细节都可能影响结果的准确性和可靠性。然而，在忙碌的实验过程中，我们往往会忽略一些看似微不足道但至关重要的步骤。今天，就让我们一起回顾那些常被cue到但又常被忽略的实验细节吧！
图片来源：GenStar官网
(1) 避免污染: 使用新的、无污染的枪头和离心管，避免交叉污染。
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(2) Mg²⁺浓度: Mg²⁺浓度影响DNA聚合酶活性，需根据具体实验调整。现在商品化SYBR qPCR mix中的 Mg²⁺浓度都 是调整好的，除非有特殊需求才需要根据具体实验调整Mg²⁺浓度。
(1) 设置阴性对照: 以PCR水替代模板设置阴性对照，排除模板污染造成的假阳性。另外，可以通过这篇文章了解一些qPCR实验的名词解释《 qPCR实验中的阳性对照，阴性对照，目标样本，NTC和NRT的概念 》。
(1) 引物设计: 引物设计应避免互补序列，3’端避免连续三个以上的G或C。可以通过这篇文章了解引物设计《 干货 | NCBI/Oligo 7/primer 5 三种方法进行PCR引物设计教程 》。
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